Indhold
Mikrobiologer undersøger mikroorganismers egenskaber, såsom alger, bakterier, protozoer, svampe og vira ved hjælp af et mikroskop. Selvom nogle organismer, såsom protozoer og gærceller, er lette at se gennem objektglas, kræver bakterieceller farvning. Forskere har udviklet flere metoder, såsom Gram-farvningsteknikken, syreresistent farvning og fluorescerende farvning for at forbedre visualiseringen af bakterieceller og cellestrukturer. Ved hjælp af sådanne farvningsmetoder er det muligt at identificere de strukturelle egenskaber, der hjælper med at klassificere bakterier.
Bedre visning
Bakterieorganismer er så små, at de fleste af dem kun er synlige under mikroskopet med en forstørrelseseffekt på 1000 gange. Imidlertid giver den enkle stigning i størrelse ikke en tilstrækkelig grad af klarhed, så bakterierne skal derfor farves inden observation for at give den nødvendige klarhed til visualisering.
Identifikation og klassificering
Farvning af bakterier for at skelne mellem typer af bakterier er kendt som differentiel farvning. Gram-plet er en differentieret plet, der adskiller bakterier afhængigt af cellevægsindholdet. I denne metode reagerer bakteriecellerne med et krystalviolet farvestof for at blive violet. Ved tilsætning af et blegemiddel mister nogle bakterieceller deres farve, mens andre ikke gør det. Ved tilsætning af safraninfarvestof bliver misfarvede celler røde, mens bakterieceller, der ikke mister farve, forbliver violette. Celler, der bliver røde, kaldes gramnegative organismer, og celler, der ikke bliver røde, klassificeres som gram-positive organismer. Gram-farvningsteknikken giver en hurtig metode til den første identifikation af bakterier, der er involveret i infektioner. Ligeledes hjælper den syreresistente farvningsproces med at specifikt identificere organismer, der tilhører den klasse af bakterier, der kaldes mycobakterier, såsom Mycobacterium tuberculosis.
Gennemførelighed
I prøver af bakteriekulturer er det ofte vigtigt at detektere tilstedeværelsen af levende bakterieceller. Metoder såsom fluorescerende farvning hjælper med at identificere, om dyrkningsceller er levedygtige eller ej. Levende bakterier har evnen til at omdanne tetrazolium 5-cyano-2,3-ditolylchlorid (CTC) til et farvestof, der viser en rød fluorescens. Derfor, når CTC-farvede kulturer udsender disse fluorescenser, indikerer det tilstedeværelsen af levedygtige bakterier. Propidiumiodid er en plet, der kun virker på ikke-levende celler, der har beskadigede membraner, og er derfor nyttig til at identificere døde bakterieceller.
Identifikation af cellulære strukturer
Farvning giver en metode til klar visualisering af forskellige cellestrukturer. For eksempel tillader Feulgen-farvningsmetoden identifikation af kernen i bakterieceller, mens Albert-farvning er nyttig til visualisering af metakromatiske granuler. Ligeledes tillader sølvimprægneringsteknikken identifikation af spiroketer. Flagella er nemme at observere, når de er farvet med Ryus farve. Malakitgrøn farvning hjælper med at identificere bakteriesporer.
