Indhold
Højtydende væskekromatografi (HPLC) er et værktøj, der bruges til at adskille stoffer fra en blanding. Adskillelse og identifikation af visse kemikalier forekommer hovedsageligt i systemets kromatografiske søjle. Mange kolonnetyper er tilgængelige for CLAE, og hver bruges til en bestemt type analyse. C18-søjlen er den mest almindeligt anvendte ikke-polære. Efter kontinuerlig brug i længere tid falder strømningshastigheden af opløsningsmidlet gennem det, og analysetiden øges. En anden årsag til faldet i analysetiden er at have prøver, der efterlader små mængder kemikalier i søjlematerialet, hvilket reducerer muligheden for at adskille dem. Gendannelsen af overfladen kan udføres ved at behandle materialet med en række specifikke opløsningsmidler for at rense det fra resterende prøver og genoplive det understøttende materiale.
Trin 1
Fjern søjle C18 fra strømningsretningen og placer den i den modsatte retning. At få opløsningsmidlet tilbage gennem det vil lindre den akkumuleringseffekt, der opstår over tid. Der skal udvises forsigtighed for ikke at efterlade for meget materiale akkumuleret i slutningen af søjlen. Nogle fabrikker bruger et større maske øverst, så når strømmen ændrer retning, er masken i nedenstående position. Denne genoprettelsesmetode kaldes tilbageførsel af strømning. For at forhindre ophobning i at strømme til systemdetektoren og muligvis forårsage en forhindring skal du lade den fungere uden at detektoren er tilsluttet og lede strømmen fra søjlen til bortskaffelse.
Trin 2
Anbring opløsningsmiddelgennemføringsrøret i en række opløsningsmidler for at eluere enhver forbindelse tilbageholdt i søjlen i den modsatte retning. Disse opløsningsmidler varierer i deres hydrofile egenskaber. Ved at variere dem eluerer du forbindelser med en lige så forskellig hydrofil karakter. Brug successivt 50 ml af hvert af følgende opløsningsmidler: vand (hvis du bruger en buffer), methanol, isopropanol, dichlormethan, hexan, dichlormethan og isopropanol.
Trin 3
Udskift søjlen i den rigtige retning, og få dit opløsningsmiddel til at strømme igennem den. Brug mindst 75 ml til at vaske det, inden du fortsætter. Test det med et mønster, du brugte, da det var nyt, og kontroller resultaterne. Vær opmærksom, når du når de maksimale fastholdelsespunkter og den samlede analysetid. I hvilken grad disse attributter matcher den indledende test, da den stadig var ny, angiver det, i hvilken grad kolonnen blev gendannet. Hvis resultaterne ikke er tilfredsstillende, skal du udskifte kolonnen med en ny og smide den gamle væk.
