Indhold
Kold alkohol bruges til at adskille DNA fra vandbaserede opløsninger, så det kan renses for efterfølgende genetisk testning. Tilsætning af alkohol til en opløsning indeholdende DNA er en enkel måde at gøre det rent ved lavere temperaturer og sænke de enzymer, der nedbryder det, hvilket giver bedre ekstraktionsresultater.
Breaking Cell Walls
Udvindingsprocedurerne for opnåelse af rent DNA skal slippe af med alle molekylære og kemiske komponenter i vævet, hvorfra DNA'et ekstraheres. De første trin indebærer ødelæggelse af cellevægge. Dette kan gøres med forskellige kemiske midler, der er kaustiske for cellemembraner, men beskadiger ikke DNA. Cellerne kan også sonikeres, homogeniseres eller formales for at ødelægge membranerne.
Fjernelse af lipider
Når cellevæggene er ødelagt, tilsættes et rengøringsmiddel for at slippe af med de fedtstoffer og olier, der udgør cellemembranerne. Rengøringsmidler forårsager opløsning af olier og fedtstoffer i opløsning.
Fjernelse af proteiner
Proteiner og enzymer kan fordøjes ved at tilsætte en protease til opløsningen. Proteaser bryder ned proteiner i små peptider og aminosyrer.
Nedfældende DNA
Tilsætningen af iskold alkohol til en opløsning vil udfælde og aggregere DNA'et. Det genetiske materiale kan opsamles ved centrifugering af prøven og dekantering af det flydende lag. Det bør eksistere som et lille sediment i bunden af centrifugerøret.
Oprensende DNA
DNA'et kan vaskes ved genudsuspension i en kold alkoholopløsning og centrifugeres flere gange for at opnå en meget ren prøve. Typiske alkoholer, der anvendes, omfatter ethanol og isopropanol. Denne proces efterlader en meget ren prøve i strenge test.
